L'analyse comparative des masses moléculaires va donc s'effectuer sur des protéines dénaturées de leurs structures tertiaires et secondaires. Un détergent de type anionique recouvre les chaînes de polymère dénaturé en leur conférant une charge (rapport charge/acide-aminé constant). Les différentes protéines d'un mélange complexe se trouvent donc recouvertes d'un « manteau » de charges négatives. Electrophorèse des protéines pdf download. Lorsqu'on applique une tension continue entre les extrémités d'un gel où a été déposé le mélange complexe de protéines, les protéines migrent au travers des mailles constituant le gel. Les mailles du gel retiendront moins les petites molécules qui auront alors la migration la plus grande. Les molécules les plus longues seront d'autant plus retenues entre les mailles du gel et auront une migration relative plus faible. Différents procédés sont utilisés pour révéler la migration des protéines. La plus courante consiste en une coloration spécifique des protéines. Le gel est coloré et il fait apparaître un profil électrophorétique qui met en évidence des bandes dont l'intensité correspond partiellement à l'abondance dans le mélange et dont la position reflète la masse moléculaire relative.
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Ceux pouvant acquérir une charge positive: La fonction guanido de l' arginine; La fonction imidazole de l' histidine; La fonction amine (-NH 2) de la lysine et de l'extrémité N-terminale de la chaîne polypeptidique. La charge nette d'une protéine dépend donc en général de sa composition en acides aminés et du pH. Electrophorèse des protéines pdf to word. Électrophorèse en veine liquide [ modifier | modifier le code] Le champ électrique est fourni par un générateur de courant continu. Le support de ce champ est constitué par une solution tampon de pH et de concentration convenables dont les ions conduisent le courant d'un pôle à un autre. Ce support peut être liquide: on parle alors d'électrophorèse en veine liquide (mise au point par Tiselius en 1937). Électrophorèse de zones [ modifier | modifier le code] Les principales applications utilisent un support poreux stabilisant la phase liquide: on parle alors d'électrophorèse sur support ou d'électrophorèse de zones. Le mélange à séparer est déposé sur un support convenable, poreux et imprégné de tampon.
Pour reprendre l'exemple de l'ADN, comme c'est une molécule chargée négativement, si on la met à un endroit sur le gel et qu'on fait passer un courant dans le gel, elle migre de la borne moins vers la borne plus. Au cours de cette migration, les brins d'ADN de petite taille migrent plus vite que les brins plus gros; le gel agit comme un tamis pour séparer les brins d'ADN en fonction de leur taille. Ainsi, au bout d'un certain temps de migration, les petites molécules d'ADN ont parcouru une plus grande distance que les molécules d'ADN plus grandes, qui se trouvent plus près de la position d'origine. Deux principaux polymères sont utilisés: l'agarose et le polyacrylamide. On peut faire varier la concentration de polymère par rapport à celle du tampon, ainsi que son taux de réticulation. Plus le polymère est concentré et réticulé, et plus la taille des pores du gel est petite. On peut ainsi ajuster les propriétés du gel à la taille des molécules à analyser [ 1]. Electrophorèse des protéines plasmatiques : diagnostic, interprétation. Électrophorèse sur gel d'agarose: l'agarose est utilisé à des concentrations de 0, 5% à 2% (masse/volume) et permet de séparer des molécules de très grande taille, principalement de l' ADN ou de l' ARN; Électrophorèse sur gel de polyacrylamide (ou PAGE pour Poly-Acrylamide Gel Electrophoresis): le polyacrylamide est utilisé à des concentrations de 4% à 20% (masse/volume) et permet de séparer des molécules plus petites: protéines, peptides et des fragments d'acides nucléiques.
Représentation graphique du résultat de l'électrophorèse de protéines sériques. L' électrophorèse des protéines (ou des protides) est une méthode d'analyse d'un mélange de protéines par une électrophorèse sur gel. Elle repose sur la capacité des protéines chargées à migrer au travers des pores d'un gel lorsqu'on applique un courant électrique. Elle est employée en protéomique ainsi qu'en médecine, principalement à partir de sérum sanguin (le plasma sanguin ne convient pas). L' électrophorèse est une technique chimique d'analyse des masses des molécules. Si on maîtrise la porosité fine du gel, les molécules vont migrer vers le pôle électrique opposé de leur charge en fonction de leur taille. Biotechnologies au lycée. Principe [ modifier | modifier le code] Représentation schématique d'une électrophorèse sur gel de protéines. Les protéines sont des molécules amphotères (qui portent des charges positives et négatives localisées sur les chaînes latérales des acides aminés). Elles adoptent des structures tridimensionnelles caractéristiques et certaines charges peuvent être exposées à la surface de la molécule, comme elles peuvent être enfouies au cœur de la molécule.
Cette masse moléculaire est comparée à des étalons commerciaux calibrés en unité de masse protéique ( Dalton). Protéinogramme [ modifier | modifier le code] Résultat d'une électrophorèse de protéines sériques. Un protéinogramme est une électrophorèse des protéines sériques. Il s'agit d'un examen médical fréquent et peu coûteux. Il se présente sous la forme d'un tracé comprenant cinq fractions: albumine, α 1 - globulines, α 2 -globulines, β-globulines et γ-globulines. Le plasma ne convient pas pour cet examen car il contient notamment du fibrinogène qui fausse les résultats. De même, un sérum hémolysé est une source d'erreur d'interprétation car la présence d' hémoglobine modifie le tracé. Electrophorèse des protéines pdf 1. Albumine [ modifier | modifier le code] C'est la fraction la plus importante (environ 60%). Elle est homogène et pure (ne contient que l' albumine). Un dédoublement du pic sur l'électrophorèse signe une bisalbuminémie. Une diminution de cette fraction traduisant une hypoalbuminémie s'observe lors d'une cirrhose hépatique ou de syndrome néphrotique.
Le support doit être homogène, poreux et inerte. En fait, la condition d'inertie n'est jamais respectée et le support joue un rôle plus ou moins important dans la séparation. Les différents types d'électrophorèses de zones sont souvent nommés en fonction du type de support ( papier, esters de cellulose, gel, etc. ): électrophorèse sur papier; électrophorèse sur acétate de cellulose; électrophorèse sur gel ( amidon, agar, agarose, polyacrylamide, etc. (PDF) Electrophorèse des protéines sériques: étude de 410 profils électrophorétiques | Ouardia Bouayadi - Academia.edu. ). Il existe de nombreux types d'électrophorèses, dont: focalisation isoélectrique (électrophorèse dans un gradient de pH); électrophorèse bidimensionnelle; électrophorèse en champ pulsé; immuno-électrophorèse (pour détecter une interaction antigène - anticorps). Électrophorèse sur gel [ modifier | modifier le code] En biochimie, l'électrophorèse sur gel est utilisée pour séparer les macromolécules biologiques (par exemple l' ADN) en fonction de leur taille et de leur charge électrique. Le gel est constitué d'une matrice de polymère baignant dans un tampon d'électrophorèse conducteur.